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植物基因組DNA提取、酶切及電泳分析
  • 發(fā)布日期:2021-08-31     信息來源:      瀏覽次數(shù):2387
    • 那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于植物基因組DNA提取、酶切及電泳分析

      一、目的

      掌握植物基因組DNA提取的一般方法及注意事項(xiàng)。大分子量DNA分子的酶切分析。

      二、原理

      十六烷基三乙基溴化胺是一種去污劑,可溶解細(xì)胞膜,它能與核酸形成復(fù)合物,在高鹽溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的,當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3

      mol/L

      NaCl)時(shí),從溶液中沉淀,通過離心就可將CTAB與核酸的復(fù)合物同蛋白質(zhì)、多糖類物質(zhì)分開,然后將CTAB與核酸的復(fù)合物沉淀溶解于高鹽溶液,再加乙醇使核酸沉淀,CTAB能溶解于乙醇。

      三、試劑與器材

      (一)、試劑

      DNA extraction 500ml

      31.885g sorbitol (山梨醇)

      6.05g tris PH8.2 (一般不調(diào))

      2、Nuclei lysis buffer: 500ml

      100ml 1M Tris PH7.5

      100ml 0.25M EDTA

      200ml 5M NaCl

      10g CTAB

      100ml ddH2O

      35% sarkosyl (N-月桂酰肌氨基鈉鹽) 500ml

      用時(shí),將上述三種溶液按110.4 比例混勻,加入亞硫酸氫鈉(3.8g/l),65℃預(yù)熱,既為抽提液。

      (二)器材

      恒溫水浴、研缽、電泳設(shè)備

      四、操作步驟

      (一)、基因組DNA提取

      0.15g左右小麥葉片,在液氮中研磨后放入1.5ml離心管中,加入700ml抽體液(65℃預(yù)熱)混勻,放入65℃水浴中,裂解40-60分鐘,期間溫和混勻幾次。

      取出裂解好的DNA ,加入700ml氯仿:異戊醇(241),猛烈混勻,離心(1000rpm,10分鐘)。

      取上清于新管中,(不要混入氯仿),加入0.8-1倍預(yù)冷異丙醇,緩慢混勻后,再猛烈混勻,使DNA成團(tuán),-20℃放半小時(shí)以上。

      將析出的DNA 離心,14000rpm,10分鐘。

      去掉上清,將沉淀用1ml 70% 乙醇清洗一次,離心 干燥,溶于50ml ddH2O

      (二)、酶切及電泳分析

      取四支1.5ml離心管,分別寫上標(biāo)記:g/EcoRⅠ(學(xué)號(hào))、g/HindⅢ(學(xué)號(hào))、λ/EcoRⅠ(學(xué)號(hào))和λ/ Hind Ⅲ(學(xué)號(hào))。

      前兩支試管加入30 ml基因組DNA。后兩支試管加入3mlλ基因組DNA

      前兩支加入5 ml 10×buffer。后兩支加入2ml 10×buffer。

      前兩支分別加入ddH2O 12.5ml,后兩支分別加入ddH2O 13ml

      分別加入RNase 1 ml。

      前兩支試管分別加入1.5 ml EcoRⅠHind Ⅲ,10000rpm離心20 S混勻。前兩支試管分別加入1 ml EcoRⅠHind

      ,10000rpm離心20 S混勻。

      37℃反應(yīng)4h

      0.8%瓊脂糖凝膠電泳(樣品全部點(diǎn)樣)。

      觀察記錄并分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果

       

      以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于植物基因組DNA提取、酶切及電泳分析。

       

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