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想了解基因擴(kuò)增儀的工作原理看此文就行
  • 發(fā)布日期:2021-12-07     信息來(lái)源:      瀏覽次數(shù):1708
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        基因擴(kuò)增儀性能能滿足不同工作環(huán)境的多種需求??捎米饕跃酆厦告?zhǔn)椒磻?yīng)為特征的、以檢測(cè)DNA/RNA為目的的各種病原體檢測(cè)及基因分析?;驍U(kuò)增儀廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)、司法科學(xué)、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)、臨床診斷、流行病學(xué)、遺傳學(xué)、基因芯片、基因檢測(cè)、基因克隆、基因表達(dá)等領(lǐng)域。
       

       

        基因擴(kuò)增儀的工作原理:
       
        1、基因擴(kuò)增的基本要素
       
        基因擴(kuò)增的基本要素與DNA復(fù)制的基本要素是一致的。
       
        ①DNA模板:待拷貝的DNA稱為模板,它可以是雙鏈DNA也可是單鏈DNA,Z后擴(kuò)增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。
       
       ?、谝铮菏荄NA復(fù)制的先鋒,就象結(jié)晶過(guò)程中的晶核,引導(dǎo)DNA的合成。在PCR擴(kuò)增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
       
        ③DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):是DNA復(fù)制的動(dòng)力,在dNTP等底物存在時(shí)在引物的引導(dǎo)下沿著模板DNA合成互補(bǔ)的DNA鏈。
       
        ④緩沖液:提供DNA合成反應(yīng)所需的pH,離子強(qiáng)度等環(huán)境。
       
       ?、?種單核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。
       
        2、基因擴(kuò)增儀原理
       
        基因擴(kuò)增儀是利用PCR技術(shù)對(duì)特定基因做體外的大量合成,用于以檢測(cè)DNA/RNA為目的的各種基因分析。
       
        PCR反應(yīng)一般設(shè)置20~40次循環(huán),每一循環(huán)包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應(yīng)。每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個(gè)循環(huán)的模板。PCR的擴(kuò)增效率很高,如果循環(huán)次數(shù)是30次,那么新生DNA片段理論上達(dá)到230拷貝(約為109個(gè)分子)。PCR反應(yīng)每個(gè)循環(huán)的三個(gè)基本反應(yīng)步驟如下:
       
        ①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA產(chǎn)物解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;
       
       ?、谀0錎NA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;
       
        ③引物的延伸:溫度升到7。

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