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DNA樣品如何收集和準(zhǔn)備進(jìn)行研究
  • 發(fā)布日期:2021-05-18     信息來(lái)源:      瀏覽次數(shù):1713
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      在對(duì)DNA進(jìn)行測(cè)序或通過(guò)基因工程對(duì)其進(jìn)行改變之前,科學(xué)家先對(duì)其進(jìn)行分離。這似乎是一項(xiàng)艱巨的任務(wù),因?yàn)榧?xì)胞包含多種其他化合物,例如蛋白質(zhì),脂肪,糖和小分子。幸運(yùn)的是,生物學(xué)家可以利用DNA的化學(xué)特性從這些污染物中分離出DNA,并為進(jìn)一步研究做準(zhǔn)備。此過(guò)程稱為DNA提取。

      細(xì)胞裂解

      有許多不同的技術(shù)用于DNA提取。單個(gè)實(shí)驗(yàn)室所使用的DNA取決于要進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)類型以及DNA的純度??茖W(xué)家通常從含有細(xì)胞的樣本開始,例如組織或血液樣本,然后將細(xì)胞弄開或裂解。您可以通過(guò)多種方式裂解細(xì)胞。添加清潔劑會(huì)使它們散開,并使其經(jīng)受高頻聲波。或者,將樣品與玻璃珠混合并使其快速振動(dòng),會(huì)物理分裂細(xì)胞并釋放其內(nèi)容物。

      快速和骯臟的方法

      如果不需要高純度,科學(xué)家可以添加一種稱為蛋白酶K的酶來(lái)分解樣品中的大多數(shù)蛋白質(zhì),然后直接使用。但是,由于大多數(shù)污染物仍然存在,因此該技術(shù)非常骯臟,因此僅在優(yōu)先考慮速度且純度不成問(wèn)題的情況下才適用。另一種快速而骯臟的方法是通過(guò)添加鹽(如銨鹽或乙酸鉀)以迫使蛋白質(zhì)沉淀來(lái)提高鹽濃度,從而去除蛋白質(zhì)。由于仍然存在許多其他污染物,因此該技術(shù)也相當(dāng)臟。

      苯酚-氯仿萃取

      另一種方法是用去污劑溶解細(xì)胞,然后將溶液與異戊醇,氯仿和苯酚混合。然后將溶液分為兩層。蛋白質(zhì)**終保留在上部有機(jī)層中,而DNA保留在下部水層中。此技術(shù)需要仔細(xì)控制鹽濃度和pH才能獲得良好結(jié)果。這很耗時(shí),而且苯酚和氯仿都是劇毒化學(xué)品。因此,雖然苯酚-氯仿萃取曾經(jīng)是常規(guī)操作,但近年來(lái)其他技術(shù)也變得越來(lái)越流行。

      陰離子交換色譜

      與苯酚-氯仿萃取相比,陰離子交換色譜法具有更高的純度和更一致的結(jié)果。管或柱中裝有小顆粒,這些小顆粒上帶有帶正電荷的位點(diǎn),帶負(fù)電荷的分子或陰離子可以與之結(jié)合。DNA與這些陰離子交換位點(diǎn)結(jié)合,而其他污染物(如蛋白質(zhì)和RNA)則從色譜柱上洗掉。之后,使用富含鹽的溶液將DNA從色譜柱中拉出。

      套件

      純化DNA,也許可靠的技術(shù)是使用特制試劑盒。這些套件在試管中包含硅膠膜。DNA會(huì)粘附在膜上,同時(shí)使用試劑盒隨附的一系列專門準(zhǔn)備的鹽溶液將其他污染物洗掉。**后,用低鹽溶液從柱子上洗掉DNA。這些試劑盒快速,易于使用,并提供可重復(fù)的結(jié)果。

      吸光度

      一旦分離出DNA并將其重新懸浮在pH控制的緩沖溶液中,后一步就是測(cè)試其純度。一種簡(jiǎn)單方便的方法是檢查它在260280納米波長(zhǎng)處吸收了多少紫外線。如果DNA是純凈的,則260納米的吸光度除以280納米的吸光度應(yīng)等于1.8。通過(guò)測(cè)量260納米的吸光度,您還可以確定DNA的濃度。

       

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