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超微量分光光度計(jì)如何檢測蛋白A280
  • 發(fā)布日期:2020-03-24     信息來源:      瀏覽次數(shù):3352
    • 超微量分光光度計(jì)如何檢測蛋白A280

      那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于超微量分光光度計(jì)如何檢測蛋白A280:

      蛋白和核酸不一樣,具有很強(qiáng)的多樣性。Protein A280功能應(yīng)用于檢測那些含有Trp、Tyr殘基或者含有Cys-Cys二硫鍵的純蛋白,這些蛋白在280nm吸光度明顯。本機(jī)方法不需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,而是檢測吸光度后,直接計(jì)算蛋白濃度。

      Protein A280顯示紫外吸收光譜,檢測280nm處的吸光度后計(jì)算濃度(mg/ml)。和核酸檢測一樣,Protein A280記錄顯示的是10mm光程下的數(shù)據(jù)。

      Nano-600在基座模式下可以*多檢測90mg/ml的BSA而不用稀釋。

      當(dāng)檢測樣品的吸光后的光強(qiáng)小于200時(shí)(10mm光程下),軟件會提示用戶選擇更小的測量光程,以保證測試的準(zhǔn)確性。熒幕如下圖顯示。

      決定液體表面張力的主要因素是溶液中水分子之間的氫鍵,通常情況下,水中的物質(zhì),如蛋白、鹽離子、去污劑等都會通過破壞水分子之間的氫鍵來減小表面張力。雖然對于大部分樣品來說,1ul的量就足夠用于檢測了,但由于表面張力下降,我們建議使用2ul的量以保證形成液柱。

      可選擇或取消基線校準(zhǔn)。蛋白檢測默認(rèn)的基線校準(zhǔn)波長為340nm,用戶可根據(jù)試驗(yàn)需要輸入不同的校準(zhǔn)波長。在任何情況下,基線都自動設(shè)定為選擇波長下的吸光度,所有波長的吸光度讀數(shù)都是減去這個(gè)值的結(jié)果。

          注意:基線校準(zhǔn)必須在進(jìn)行樣品檢測之前設(shè)定,樣品檢測之后設(shè)定無效。不選擇基線校準(zhǔn),光譜值將會產(chǎn)生偏移,計(jì)算的濃度也會改變。

      ⑵操作步驟:

      ①設(shè)定項(xiàng)目名稱和樣品編號與蛋白類型;

      ②使用緩沖液建立空白對照:取2ul空白溶液加到下基座上,放下上基座并點(diǎn)擊“空白”;

      ③使用干凈無塵布把基座上的空白溶液擦干凈;

          ④取2ul樣品滴加到下基座上,放下上基座,點(diǎn)擊“樣品”進(jìn)行檢測,檢測完成后界面如圖4.10;

          注意:每次檢測的樣品都必須是剛加入的。

      ⑤檢測完成后,必須用干凈的無塵布擦掉上下基座上的樣品,才可以檢測下一個(gè)樣品。

       

      以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于超微量分光光度計(jì)如何檢測蛋白A280。

       

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