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應(yīng)用紫外分光光度法應(yīng)該注意的環(huán)節(jié)
  • 發(fā)布日期:2019-10-29     信息來源:      瀏覽次數(shù):1889
    • 使用UV法應(yīng)注意以下環(huán)節(jié):

             1 儀器的校正和檢定:

             1.1 波長  由于溫度變化對(duì)機(jī)械部分的影響,儀器的波長經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng),因此除應(yīng)定期對(duì)所用的儀器進(jìn)行**校正檢定外,還應(yīng)于測定前校正測定波長。

             1.2 吸收度 吸收度的準(zhǔn)確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。

             1.3 狹縫寬度  選擇儀器的狹縫寬度,應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn),對(duì)于《中藥典》UV法測定的大部分品種,可以使用2nm縫寬,但對(duì)某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度檢查則需要1nm縫寬或更窄,否則其264nm的吸收度會(huì)偏低。

             1.4 天平和玻璃儀器的檢定所用的容量儀器及分析天平應(yīng)經(jīng)過檢定,如有偏差應(yīng)加上校正值。

             1.5 吸收池配對(duì)  石英吸收池對(duì)紫外光亦有吸收,1 em的吸收池在波長220~270 nm的范圍內(nèi),以空氣作為,其透光率往往小于,同時(shí)每個(gè)吸收池不可能*相同,故在每次測定前應(yīng)做吸收池配對(duì)試驗(yàn)。方法是取干燥潔凈的吸收池,均裝入測定用空白溶劑,以只吸收池作空白,用測定時(shí)所用的波長測定其他吸收池的吸收度,后選擇吸收小的只作為配對(duì),測定并記錄下其它吸收池的吸收度,供試品液的實(shí)際吸收度應(yīng)是與吸收池(有空白溶劑時(shí))吸收度之差。為減少誤差,常用個(gè)配對(duì)杯測定若干樣品(也減少計(jì)算麻煩),但應(yīng)注意換液時(shí)充分洗滌。

              2 對(duì)溶劑的要求:由于溶劑與溶質(zhì)分子間形成氫鍵、偶化等的影響,可以使溶質(zhì)吸收波長發(fā)生位移。通常性溶劑比非性溶劑的影響大,在選擇溶劑時(shí)應(yīng)予以注意。測定供試品前,應(yīng)先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否有吸收峰,是否影響供試品測定。每次測定時(shí)應(yīng)采用同廠、同批號(hào)的試劑配制混合均勻的同批溶劑。

              3 檢驗(yàn): 3.1 溶液配制  稱量應(yīng)按藥典規(guī)定進(jìn)行。配制測定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少,轉(zhuǎn)移稀釋時(shí)所取容積般應(yīng)不少于5mL。含量測定供試品應(yīng)稱取2份,如為對(duì)照品比較法,對(duì)照品也應(yīng)稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱取供試品2份,平行操作。每份結(jié)果對(duì)平均值的偏差應(yīng)在4-0.5%以內(nèi)。作鑒別或檢查時(shí)可取樣品1份。

               3.2 測定  除另有規(guī)定外,應(yīng)在規(guī)定的吸收峰波長4-2 nm以內(nèi),再測試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度,以核對(duì)供試品的吸收峰波長位置是否正確,除另有規(guī)定外,吸收峰**長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長4-1nm以內(nèi),否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長的準(zhǔn)確度。取吸收池時(shí),手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。樣品溶液的量以池體積的4/5為宜,使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋,透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈,檢視應(yīng)無殘留溶劑,為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面,可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭,然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放人樣品室時(shí)應(yīng)注意每次放入的方向相同。使用后用洗滌劑及水沖洗干凈,晾干防塵保存。吸收池如污染不易洗凈時(shí)可用發(fā)煙硫酸+硝酸(3:1 )混合液稍加浸泡后,洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時(shí),吸收池不宜在清潔液中長時(shí)間浸泡,否則清潔液中的鉻酸鉀結(jié)晶會(huì)損壞吸收池的光學(xué)表面,并應(yīng)充分用水沖洗,以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。

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