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生物化學(xué)發(fā)光測量儀原理,作用和特點(diǎn)
  • 發(fā)布日期:2019-06-21     信息來源:      瀏覽次數(shù):2042
    • 再論生物化學(xué)發(fā)光測量儀原理,作用和特點(diǎn)

      生物化學(xué)發(fā)光測量儀的化學(xué)發(fā)光作為一種分析工具的吸引之處就在于檢測的簡單性?;瘜W(xué)發(fā)光的實(shí)質(zhì)是自身發(fā)光,這意味著化學(xué)發(fā)光的分析測試儀器只需要提供一種可以檢測光信號和紀(jì)錄結(jié)果的方法就可以了。自發(fā)光檢測儀需要一個(gè)閉光的樣品室和光檢測器。*簡單的便是相片紙或X 光片,甚至視覺檢測器都可以。

      化學(xué)發(fā)光檢測方法的簡單性使得它的應(yīng)用很簡單并且*可以自動化。但是它的靈敏度又是怎么樣的呢?化學(xué)發(fā)光有如下兩個(gè)內(nèi)在的優(yōu)勢:

      1.絕大多數(shù)的樣品沒有“背景”信號,如它們自身不發(fā)光。

      2.化學(xué)發(fā)光的檢測不是一個(gè)比例測試,這是與熒光和吸收或比色測試不同的。在熒光測試中,具有小的Stokes Shift的熒光基團(tuán)非常難檢測。熒光很難從激發(fā)波長中分辨出來。 另外一個(gè)問題是,特別在樣品是渾濁的情況下有一部分雜光會進(jìn)入到檢測器。

      在吸收光測試上,其靈敏度受到限制的根本因素是需要在兩個(gè)相對較強(qiáng)的信號之間去區(qū)分一個(gè)較小的差別。

      需要注意的是檢測器對光譜的敏感性近可能接近化學(xué)發(fā)光的光譜,以得到*大化的靈敏度。一般在自發(fā)光儀中的光電倍增管對藍(lán)光有*佳的反應(yīng),對紅光的末端光譜不太敏感。固態(tài)檢測器對紅光有較好的反應(yīng)。

      X 光片廣泛用于記錄在尼龍膜、纖維素膜或PVDF 膜上的化學(xué)發(fā)光印跡分析。但是我們需要牢記在心的是X 光片僅能夠用于檢測紫外到藍(lán)光光譜范圍內(nèi)的光信號,雖然有一些特殊的光片對增強(qiáng)的綠光有敏感性。

      生物化學(xué)發(fā)光測量儀液體樣品的檢測

      有一些特定的詞來描繪化學(xué)發(fā)光檢測:靈敏度、線性和動態(tài)范圍。每一個(gè)詞的意義如下:

      1.靈敏度指的是某種東西可靠檢測的*低水平。“某種東西”是指在一個(gè)分析測試中的測試物。測試物是被標(biāo)記了一種可檢測的東西,如化學(xué)發(fā)光化合物或的一種酶。分析物也可以是一種通過與具有標(biāo)記的親合物有特異性結(jié)合反應(yīng)而檢測的物質(zhì)。所謂的可靠檢測指的是針對一個(gè)空白測試樣品,檢測器能夠重復(fù)感應(yīng)到*低水平的信號,而這種信號是由所檢測物本身產(chǎn)生的。

      2.線性描述的是信號與分析檢測物濃度范圍之間的關(guān)系。理想的比例因子是常數(shù);信號點(diǎn)與分析檢測物是一條直線關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以不是直線,如s 形,仍是有用的。

      3.動態(tài)范圍指的是被檢測物濃度與信號單一模式的變換范圍。它定義的是分析的工作范圍。

      通過生物化學(xué)發(fā)光測量儀的化學(xué)發(fā)光得到什么水平的靈敏度呢?答案不一定會滿足你的要求,“它是有條件的”。在很少情況下,檢測器的靈敏度或化學(xué)發(fā)光方**是檢測的局限因素?,F(xiàn)在的檢測器可以達(dá)到很高的靈敏度。大多數(shù)情況下,而是其它的一些因素顯示了分析檢測的靈敏度。*通常的是生物成分(抗體、酶等)的非特異性結(jié)合到反應(yīng)容器和支持物的表面。例如,mianyi分析,印跡實(shí)驗(yàn),核酸雜交和其它的酶聯(lián)結(jié)合實(shí)驗(yàn)都是受制于此因素。

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