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多肽純化的多種問(wèn)題解答
  • 發(fā)布日期:2018-01-12     信息來(lái)源:      瀏覽次數(shù):4148
    • 1. 多肽含量與多肽純度有什么區(qū)別?
      一條多肽產(chǎn)品中除了多肽本身還包括生產(chǎn)過(guò)程中帶入的水份及有機(jī)鹽分等雜質(zhì),多肽純度僅指多肽本身所含肽產(chǎn)品的含量及雜質(zhì)的含量,不包括水份等雜質(zhì);而多肽含量則是指目標(biāo)多肽在產(chǎn)品中的凈含量,一般以N元素分析或氨基酸分子的方法來(lái)檢測(cè);因此一條多肽即使純度達(dá)到99%,因?yàn)楫a(chǎn)品中還包含水份及有機(jī)鹽分等,它的含量可能也只有70-80%。
      2. 如何選擇純化過(guò)程中使用的色譜柱填料?
      不同序列的多肽理化性質(zhì)及疏水性有很大的區(qū)別,多數(shù)情況分子量小于4000和親水性多肽用C18柱分離效果*,分子量大于5000和疏水性的多肽以C4柱分離效果*,而C8柱介于C18和C4柱之間,其應(yīng)用效果與C18柱更相似;對(duì)一些特殊選擇性的多肽,也可選擇苯基柱和聚合物色譜柱。
      3. 在純化過(guò)程中選擇聚合物填料的原則是什么?
      需要使用高于正常pH或溫度條件進(jìn)行純化時(shí),可以使用pH范圍極寬的聚合物色譜柱,它的優(yōu)點(diǎn)就是在pH條件下不會(huì)降解,可以使用強(qiáng)酸和強(qiáng)堿作為流動(dòng)相進(jìn)行分離純化。
      4. 影響多肽純度檢測(cè)結(jié)果的因素
      影響多肽純度檢測(cè)結(jié)果的因素很多,主要包括:流動(dòng)相體系、色譜柱型號(hào)、柱溫、波長(zhǎng)及色譜儀的性能指標(biāo),每一項(xiàng)不同都可能造成結(jié)果產(chǎn)生誤差。
      5. 反相色譜分離純化后,怎樣去除產(chǎn)品中流動(dòng)相產(chǎn)品中的TFA,乙腈等雜質(zhì)?
      凍干的辦法應(yīng)該可以除去大多數(shù)TFA和乙腈,只要不超過(guò)允許范圍,這種辦法是zui簡(jiǎn)單、有效的。對(duì)TFA含量要求更高的一些藥物肽凍干的方法一般無(wú)法*達(dá)到要求,需要進(jìn)行專(zhuān)門(mén)的轉(zhuǎn)鹽或脫鹽。 
      6. 多肽一般有哪幾種鹽的形式?通過(guò)什么方式轉(zhuǎn)鹽或脫鹽?
      多數(shù)多肽都是在TFA體系下分離純化的,所以多肽以TFA鹽的形式zui多,其次藥物肽一般有醋酸鹽及鹽酸鹽的形式,極少數(shù)藥物肽會(huì)有一些特殊的鹽形式。轉(zhuǎn)鹽方式多為離子交換法和HPLC法,而脫鹽可用透析袋和超濾膜。
      7. TFA在緩沖液中是不是只起到調(diào)節(jié)PH的作用?TFA的濃度越高基線漂移越厲害,那是不是說(shuō)TFA的濃度在緩沖液PH允許的情況下越低越好?
      (1)TFA起到類(lèi)似離子對(duì)的作用,一般濃度在0.05-0.1%,過(guò)高的濃度,會(huì)使溶液偏酸,長(zhǎng)時(shí)間使用可能影響柱子壽命。
      (2)同時(shí)TFA可以抑制硅膠表面硅醇基,改善堿性化合物的峰型。有時(shí)0.1%TFA分離不好的話??梢钥紤]加大濃度到0.2%。但要注意用完后及時(shí)沖洗色譜柱。
      (3)走梯度時(shí),因?yàn)樽叱苫€漂移,但對(duì)制備的影響不大。

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